Beschreibung
Die papierchromatographische Methode hat auf Grund ihres relativ geringen apparativen Aufwandes, des zu erzielenden hohen Trenneffektes und der zur Analyse benötigten geringen Substanzmengen neue Aspekte für die biochemische Analyse im biologischen Laboratorium geboten. Zahlreiche Probleme sind in Angriff genommen worden, die auf Grund des geringen zur Verfügung stehenden Ausgangsmaterials einer experi mentellen Untersuchung früher nicht zugänglich waren. Vorliegende Dar stellung bringt in 2. Auflage die Anwendung papierchromatographischer Techniken für diejenigen Substanzen, die im Rahmen botanisch-bio chemischer Fragestellungen von Interesse sind. Die Bearbeiter verfügen jeweils über eigene experimentelle Erfahrung im Bereich der dargestellten Stoffgruppe. Die Methoden und ihre Anwendung auf pflanzliche Objekte sind so ausführlich dargestellt, daß ein Nacharbeiten im allgemeinen ohne Hinzuziehen der Originalliteratur möglich ist. Es wurde wiederum nicht angestrebt, alle bisher beschriebenen Methoden zu erfassen. Vielmehr sind die brauchbarsten und erprobten Arbeitsgänge unter besonderer Berück sichtigung der Aufarbeitungsverfahren zusammengetragen. Bezüglich einer ausführlichen theoretischen Grundlegung und der zahlreichen ständig neu entwickelten apparativen Möglichkeiten sei auf die zusammenfassenden Darstellungen in der Bibliographie verwiesen. Mit allem Nachdruck muß wiederum auf die Grenze der papier chromatographischen Methodik hingewiesen werden. Es hat sich in den vergangenen Jahren gezeigt, daß sie zwar eine bedeutsame Erweiterung des methodischen Repertoirs besonders für den Biologen darstellt, jedoch keineswegs die klassischen Verfahren der Mikroanalyse überflüssig macht.
Inhaltsverzeichnis
InhaltsangabeAllgemeiner Teil.- A. Theorie der Papierchromatographie.- 1. Einleitung.- 2. Die Craig-Methode.- 3. Papierchromatographie.- Literatur.- B. Einrichtung eines papierchromatographischen Laboratoriums.- 1. Arbeitsraum.- 2. Dunkelraum.- 3. Chromatographieraum.- C. Techniken.- I. Eindimensionales Verfahren.- 1. Die absteigende Methode.- 2. Die aufsteigende Methode.- 3. Die Mikromethode.- II. Zweidimensionale Verfahren.- III. Mehrdimensionale Verfahren.- IV. Rundfilter-Technik.- V. Präparative Papierchromatographie.- VI. Papierelektrophorese.- D. Papiere.- Sonderpapiere.- 1. Hydrophobierte Papiere.- 2. Carboxyl-Papiere.- 3. Austauscher-Papiere.- E. Aufbereitung.- I. Extraktion.- II. Störsubstanzen.- 1. Entsalzen.- 2. Entfernen von Lipoiden.- 3. Entfernen von Eiweiß.- III. Einengen.- F. Auftragen und Trocknen.- G. Fehlerquellen.- H. Auswertung und Dokumentation.- Literatur.- J. Isotopentechnik.- I. Qualitative Technik.- 1. Lokalisierung durch Autoradiographie.- Arbeitsgänge zur Identifizierung unbekannter radioaktiver Substanzen in einem Gemisch.- a) Einbau der Isotopen in den pflanzlichen Organismus.- b) Extraktion und Identifikation.- 2. Zählrohrtechnik.- Analyse einer Mischung von Stoffen mit der Leitisotopen-Technik.- a) Identifizierung nicht markierter Stoffe mit der LeitisotopDerivat-Technik.- b) Identifizierung von nicht-markierten Substanzen durch Reaktion mit einem radioaktiven Reagens.- II. Quantitative Technik.- 1. Interpretation des Chromatogramms.- a) N ullettekt ("background activity").- b) Handhabung der Proben.- c) Absorption und Selbst-Absorption der Strahlung.- d) Intensitätsbefall.- 2. Quantitative Bestimmungen.- a) Isotop-Derivat-Indicator-Technik.- b) Kupfer-Chelat-Technik.- Literatur.- Spezieller Teil.- A. Anorganische Kationen und Anionen.- I. Aufbereitung des Materials.- 1. Trockene Veraschung.- 2. Nasse Veraschung.- a) Mit rauchender Salpetersäure.- b) Mit konz. Schwefelsäure.- c) Mit rauchender Salpetersäure und konz. Schwefelsäure.- 3. Soda-Schmelze zur Bestimmung der Anionen.- II. Papier, Geräte.- 1. Papier und dessen Reinigung.- 2. Pipetten, Büretten.- III. Met hode.- IV Lösungsmittel und RF-Werte.- V. Nachweis.- 1. Physikalische Methoden.- a) Radioaktive Isotope.- b) Colorimetrische Methode.- c) Spektrographische Analyse.- 2. Chemische Methoden.- VI. Quantitative Bestimmungsmethoden.- 1. Bestimmung auf dem Papier.- a) Auf Grund der Fleckengröße.- b) Durch Intensitätsmessung.- 2. Isolierung der getrennten Substanzen und anschließende Bestimmung.- 3. Spezielle quantitative Methoden.- a) Alkali- und Erdalkali-Ionen.- b) Bestimmung von Molybdän.- c) Bestimmung von Kupfer und Eisen.- Literatur.- B. Kohlenhydrate.- I. Mono-, Oligosaccharide.- 1. Verarbeitung des Pflanzenmaterials.- 2. Trennung der Zuckergemische. Lösungsmittel.- 3. Nachweis der Zucker.- a) Ammoniakalisches Silbernitrat.- b) Triphenyltetrazoliumchlorid (TTC).- c) 3,4-Dinitro-benzoesäure.- d) 3,5-Dinitrosalicylsäure.- e) Kaliumferricyanid.- f) Natriumperjodat.- g) Kaliumpermanganat.- h) Naphthoresorcin-Trichloressigsäure.- i) Naphthoresorcin-Phosphorsäure.- k) Orcin-Trichloressigsäure.- l) Phloroglucin-Trichloressigsäure.- m) Anilin-Phthalsäure.- n) Anilin-Phosphorsäure.- o) m-Phenylendiamin.- p) p-Amino-dimethylanilin.- q) p-Anisidin-Phosphorsäure.- r) ?-Naphthylamin.- s) Benzidin-Trichloressigsäure.- t) p-Amino-Hippursäure.- u) Harnstoff-Salzsäure.- v) Dinitrophenylhydrazin.- 4. Quantitative Bestimmung.- a) Visueller Vergleich.- b) Bestimmung nach der Fleckengröße.- c) Photometrische Bestimmung des gebildeten Farbstoffes.- d) Extraktion des Zuckers und anschließende Mikrobestimmung.- ?) Oxydation mit dem Kupferreagens nach Somogyi.- ?) Perj odat-Oxydation.- ?) Colorimetrische Bestimmung nach Somogyi-Nelson.- ?) Colorimetrische Bestimmung mit Anilin-Phthalsäure.- ?) Colorimetrische Bestimmung mit Diphenylamin.- ?) Colorimetrische Bestimmung mit Anthron.- II. Zucker-Derivate.- 1. Uronsäuren.- 2. Zuckeralkohole.- 3. Aminozucker.- 4. Zucker-Phospho
Herstellerkennzeichnung:
Springer Verlag GmbH
Tiergartenstr. 17
69121 Heidelberg
DE
E-Mail: juergen.hartmann@springer.com
